RNA依赖性慢病毒稳定株筛选

2022-02-07 02:06:58 来源:
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催化反应RNA依赖性新科技是一种抗体地阻断某些基因暗示的深入研究新科技手段,在、菌株病菌,遗传病及其它病症的治疗里均有广泛应用。很慢菌株核酸是一类来源于重一组逆转录菌株的核酸,由于具有可以病菌非分离期与分离期细胞内,容纳大的外源性用意 基因片段,免疫反应小等特点,现已成为转回用意 基因转到灵长类细胞内的即使如此核酸。将很慢菌株核酸应用于RNA依赖性当里,可以抗体消除灵长类的各类细胞内里基因的暗示,成为基因功能深入研究和生物新科技的令人吃惊新科技手段。现在深入研究确实很慢菌株核酸能在灵长类各类细胞内安定暗示siRNA,长期消除基因暗示。为建立细胞内模型先前生物新科技备有有效性的深入研究新科技手段。

生博现在为客户选取过几百种基因的依赖性片断,并通过很慢菌株赢取几十种安定细胞内株。为先前深入研究生物新科技备有了有效性依据。

BXXX1基因依赖性安定HeLa细胞内株构筑

第一部分:BXXX1依赖性核酸构筑(核酸pMagic 4.1)

siRNA设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二部分QPCR筛靶科学实验

Real-time PCR探测得出结论: HeLa细胞内里,比较NC一组, 四个机理里,KD2,KD4对用意基因BXXX1的暗示的敲减为效率大幅提高80%以上,KD3对用意基因BXXX1的暗示的敲减为效率也大幅提高50%以上,都是有效性机理。

第三部分Western blot内源有效性科学实验报告

Western Blot探测结果

电子束说明:

M 为Marker;

1 CON为出现异常用意空细胞内(HeLa)电子束;

2 NC为出现异常用意细胞内(HeLa),沙阴性相异菌株病菌的细胞内电子束(Negative Control);

3 KD为出现异常用意细胞内(HeLa),沙RNAi机理菌株病菌的细胞内电子束(Knock Down)

从Western Blot结果可以看出,KD1,KD2机理对HeLa细胞内BXXX1的暗示有敲减为效用,为有效性机理。

第四部分:依赖性很慢菌株KD1.、相异很慢菌株CMV-GFP-L.V.病菌HeLa细胞内株后选取安定株。

HeLa 白光一组 White light荧光一组 Fluoresce 稀释度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、科学实验阐述:

1、HeLa细胞内病菌KD1.很慢菌株,MOI 10、MOI 20时毒性大,死细胞内多。若只计活细胞内,病菌成本高,都少于80%。

2、HeLa细胞内病菌CMV-GFP-L.V.很慢菌株,MOI 10、MOI 20时病菌成本高,都少于90%。

3、传代培养后,最终选取出HeLa- KD1 MOI 10安定株,HeLa- KD1 MOI 20安定株、HeLa- CMV-GFP MOI 20安定株。

校对: 陈

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